细胞培养时容易出现的误区
实验干货 分享
2023-05-10
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误区一:没有“查”和“证”,跟用其他实验室用的细胞培养基

对于细胞培养所使用的培养,其实并没有严格限制,同一种细胞,在不同的实验室,也可能会采用不同种类的培养基。关于培养基选择,可参考以下方法:

(1)如果条件允许,最好是建立该细胞株所用的培养基;

(2)其次可以参考文献,

(3)也可以用实验室常用的培养基进行尝试,当然最重要的还是根据细胞株的特点、实验的需要来选择,如果不嫌麻烦的话,可以用多种培养基培养,根据实际效果选择。



误区二:长期使用抗生素,以对抗污染

细胞培养无污染时,不应该常规使用抗生素,抗生素的作用是抑制细菌生长,避免细胞污染连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生,导致轻度污染持续存在,一旦将抗生素从培养基中去除,这种轻度污染最终将发展成大规模污染,会掩盖支原体感染及其他隐性污染

有些抗生素会与细胞发生交叉反应,干扰细胞研究,影响实验结果。

加不加抗生素不是绝对的,需视实际情况而定。如果你实验室条件足够好,操作足够规范,就尽量不要加双抗了。

 

 

误区三:培养基中的谷氨酰胺容易降解,需要不断补充

L-谷氨酰胺在溶液中状态不稳定,经过一段时间后会降解,它的降解速率随保存时间,保存温度及保存环境pH值等变化而变化。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质的重要原材料,在细胞培养中,几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,谷氨酰胺缺乏会导致细胞生长不良甚至死亡。但是,如果我们保存得到和使用得当,并不需要频繁添加谷氨酰胺。

正常情况下,如果正确使用谷氨酰胺,一般是不需要要额外补加,正确用法如下:

(1)4℃避光保存;

(2)分装,不要反复预热;

(3) 含有谷氨酰胺的培养基,开封后应尽快用完。


 

误区四:培养基误存于-20℃,溶解后继续使用

无论是培养基干粉还是培养基溶液,都应该在4度中保存。如果培养基被误存在-20℃下,培养基中的盐容易析出,培养基融化后,有的盐可能无法重新溶解,从而导致培养基营养成分和渗透压改变,培养细胞时,容易细胞破裂而死亡。

这时候建议丢弃该培养基,重新购买新的培养基或者配置新的培养基用于细胞培养。


 

误区五:无检测血清批次,直接切换使用

血清来源于动物,组成成分有1000种左右,每个批号的组分和组分含量都是不确定的,批间差异是可能存在的。如果某一个批次血清使用效果较好,记住批号,可以在订货的时候给予说明;如果需要换不同批号的血清,提前查询COA文件,寻找测试结果接近的批次。

对于不确定效果的血清,可以先订购一瓶试用,试用成功之后再大量订购该批号血清。




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