技术简介 ║
Pull-Down的概念与Co-IP类似,Pull-Down旨在证明两种蛋白质之间的相互作用或探索可与目的蛋白结合的未知蛋白。Pull-Down不同于IP或Co-IP之处在于,它不是基于抗体-抗原相互作用,而是通过将诱饵蛋白通过非抗体亲和系统固定到基质上,从而获取与已知诱饵蛋白结合的蛋白或配体。
1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合标签从细菌中一步纯化出GST融合蛋白,从此GST融合蛋白在蛋白质相互作用研究领域里得到了极大的推广。GST融合蛋白可以与谷胱甘肽GSH的相互作用而被吸附。从而GST融合蛋白就可以得到能够与“诱饵”蛋白相互作用的兴趣蛋白。将GSH固定于琼脂糖珠上,形成GSH-琼脂糖珠。
将已知的诱饵蛋白构建到GST融合表达载体,诱饵蛋白于GST标签融合表达,获得的GST诱饵融合蛋白就可以与GSH-琼脂糖磁珠/树脂结合,若环境中存在与诱饵蛋白互做的蛋白,则会形成“琼脂糖珠-GSH-GST-诱饵蛋白-互作蛋白”复合物,与诱饵蛋白互做的蛋白即可经免疫印迹或质谱检测。
Pull down服务内容║
服务类型 | 客户提供 | 服务内容 | 周期 | 价格 |
GST Pull down-WB |
ü GST诱饵蛋白原核表达质粒(或诱饵基因模板,我司构建GST原核表达质粒) ü 实验样本 ü 待验证目的蛋白WB抗体 ü 实验信息表
| ² (选做)GST/His原核表达载体构建 ² 诱饵蛋白原核表达,诱饵蛋白Western blot检测 ² 样本裂解 ² 裂解液中待验证的蛋白Western blot检测 ² GST/His Pull down实验 ² Pull down产物Western blot检测 ² 出具实验报告 | 3周 | |
His Pull down-WB | ü His诱饵蛋白原核表达质粒(或诱饵基因模板,我司构建His原核表达质粒) ü 实验样本 ü 待验证目的蛋白WB抗体 ü 实验信息表
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GST Pull down-MS |
ü GST诱饵蛋白原核表达质粒(或诱饵基因模板,我司构建GST原核表达质粒) ü 实验样本 ü 实验信息表
| ² (选做)GST/His原核表达载体构建 ² 诱饵蛋白原核表达,诱饵蛋白Western blot检测 ² 样本裂解 ² GST/His Pull down实验 ² Pull down产物Western blot检测诱饵蛋白 ² Pull down产物质谱检测和分析 ² 出具实验报告 | 7周 | |
His Pull down-MS | ü His诱饵蛋白原核表达质粒(或诱饵基因模板,我司构建His原核表达质粒) ü 实验样本 ü 实验信息表
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服务流程║
结果案例 ║