细胞增殖测定、药敏试验、细胞毒性测定、抗肿瘤药物筛选
● 技术简介 ●
CCK8全称Cell Counting Kit-8试剂，该试剂中含有水溶性的四唑盐WST-8，它在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物，甲瓒产物生成的数量与活细胞的数量成正比，利用酶联免疫检测其在450nm波长处测定其吸光度值，可间接反应活细胞数量。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该方法常用于细胞增殖测定、药敏试验、细胞毒性测定、抗肿瘤药物筛选等。
● 实验方法 ●
（2）种板：根据检测时间点准备相对应数量的96孔板来进行种板，如需在0h、6h、24、48h检测则需要准备4块板。消化细胞后吹打散细胞，制备细胞悬液后计数，实验组根据实细胞情况将特定的细胞量接种到96孔板（细胞增殖实验1000-3000 cell/孔，细胞毒性实验5000-10000 cell/孔），培养基含量为100μl，每组处理组设计3-5个复孔，在边缘孔中加入PBS缓冲液100μl,空白组为正常培养基100μl。置于37℃ 5％ CO2培养箱中培养; （3）贴壁细胞需待细胞贴壁后，吸出培养基，对实验组进行加药处理或者质粒转染，空白组更换正常培养基。 （4）实验组每个孔加入CCK-8溶液，比例为1/10，即100ul培养液加入10ul检测液；在37℃ 5％ CO2培养箱中孵育3-4小时。 （5）将96孔板于酶标仪读板，读取OD450数据；读取数据后，对数据进行处理和作图。 计算方法 细胞存活率 = [（实验组As-空白组Ab）/ （对照组Ac-空白组Ab）] × 100% 细胞抑制率 = [（对照组Ac-实验组As） / （对照组 Ac-空白组Ab）] × 100% 或 细胞抑制率=（1-实验组OD值均值÷对照组OD值均值）×100%（同一时间） 实验组As （含细胞、含培养基、CCK-8、药物） 对照组Ac （含细胞、含培养基、CCK-8，不含药物） 空白组Ab （不含细胞、含培养基、CCK-8、不含药物） |
● 服务类型 ●
项目名称 | 内容 | 周期 | 价格 |
CCK8检测 | 检测细胞增殖 | 2周 |
● 结果展示 ●
0h | 6h | 24h | 48h | 72h | |
blank | 0.209 | 0.21 | 0.214 | 0.214 | 0.204 |
0.206 | 0.211 | 0.213 | 0.206 | 0.203 | |
0.207 | 0.205 | 0.205 | 0.207 | 0.207 | |
control | 0.324 | 0.563 | 0.981 | 1.346 | 1.553 |
0.326 | 0.564 | 0.988 | 1.336 | 1.559 | |
0.337 | 0.567 | 0.970 | 1.321 | 1.561 | |
Treat 1 | 0.320 | 0.566 | 0.964 | 1.258 | 1.427 |
0.333 | 0.551 | 0.975 | 1.216 | 1.424 | |
0.338 | 0.546 | 0.940 | 1.266 | 1.427 | |
Treat 2 | 0.349 | 0.551 | 0.820 | 1.079 | 1.254 |
0.318 | 0.557 | 0.826 | 1.081 | 1.251 | |
0.321 | 0.546 | 0.834 | 1.097 | 1.258 | |
Treat 3 | 0.327 | 0.532 | 0.744 | 0.933 | 1.106 |
0.320 | 0.557 | 0.768 | 0.936 | 1.109 | |
0.338 | 0.541 | 0.777 | 0.991 | 1.105 |
● 技术优势 ●
→ 检测快速
→ 检测试剂稳定
→ 灵敏度高，可测试较低密度的细胞
→ 酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰
→ WST-8的细胞毒性非常低，被稀释后基本无毒，因此可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到佳测定时间
● 注意事项 ●
（1）接种细胞时，接种在96孔板的中的细胞，如果是细胞增殖实验，通常接种的细胞量为1000-3000/孔；如果是细胞毒性实验，细胞接种量为5000-10000/孔。
（2）96孔板的培养基量通常为100ul，通常先在血球计数板进行细胞计数，加入适量的培养基调整合适的细胞浓度，加入100ul的量接种96孔板；
（3）制备细胞悬液时一定要使细胞悬液充分混匀，降低出现细胞团块的几率；
（4）通常加CCK8有2种方式:
一是每孔直接加10μl的CCK8原液入孔板中；该方法可能会由于量少吸取、挂壁等原因较容易出现误差；
二是先按照1：10的比例配置含CCK8的完全培养基后，以换液的方法加入孔板；该方式可较大程度避免第一种误差情况的发生，但该方法需要注意， 10%的CCK-8培养基需要现配现用；其次加入CCK-8培养基时沿着孔壁缓缓打出液体。
