油红O脂肪染色法通常应用于检测组织或细胞内的脂肪情况,油性红O(Oil Red O)是一种脂溶性染料,是很强的脂溶剂和染脂剂,在脂肪内能高度溶解,其染色原理是油红O能特异性地与组织和细胞内的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白产生吸附作用从而使脂肪染色。染料在胞内脂质中的溶解度较溶液更大,当燃料加入组织切片时,燃料从有机溶剂转移而溶于组织内的脂质中,使组织内的脂肪呈红色。该染色方法用于分析细胞样品中脂质状况。
①
冰冻切片厚度 6~10µm,不固定或 10%福尔马林固定 10min后水洗;
②
切片加入60%的异丙醇内浸洗 2min;
③
用冰蒸馏水稍微清洗一遍;
④
切片加入改良油红 O 染色液中,密闭染色 10~15min,该过程注意避(5)用冰蒸馏水清洗一遍;
⑤
加入 60%的异丙醇内稍洗以去除染液(大约几秒);
⑥
加入冰蒸馏水中稍微清洗一遍;
⑦
Mayer 苏木素染色液复染核 5min;
⑧
用冰蒸馏水清洗一遍;
⑨
片子用滤纸吸干水分;
⑩
用甘油明胶或阿拉伯糖胶封片。
◆ 结果图例 ◆
项目名称 | 内容 | 周期 | 价格 |
油红O染色 | 检测组织或细胞内的脂肪情况 | 2-3周 | 询价 |
切片的厚度要稍微厚一些,建议选择8-10μm;
石蜡切片不能用于油红O染色,原因在于石蜡包埋过程中需要脱水,脱水过程中需要乙醇-二甲苯和石蜡,二甲苯是有机溶剂,会把中性脂肪溶解;
冰冻切片准备时,包埋的降温过程建议选择干冰,原因在于若选择液氮降温过程较强烈,可能导致组织内部炸裂,而干冰降温的过程比较缓和,染出来的片子比较好看;
实验设计建议设计阴性对照和阳性对照,如阳性对照可以用脂质丰富的肝脏组织等,阴性对照可以根据文献来选择无脂肪沉积的组织。