稳定细胞株构建是基因功能研究、药物筛选和工业生产中的关键技术。与传统质粒转染和病毒转导方法相比，转座子介导的基因整合因其操作简单、基因表达稳定而备受关注。转座子，又称“跳跃基因”，是存在于生物基因组中的可移动遗传元件。转座子系统由两部分组成：包含外源基因的转座子载体和表达转座酶的辅助载体。当两者共同导入细胞后，转座酶会识别转座子两端的末端反向重复序列，并将目的基因从载体上精确切割下来，整合到基因组中。
与慢病毒系统相比，转座子系统不需要包装病毒，实验周期缩短一半，且生物安全性更高。
四步实现稳定细胞株，构建转座子介导的过表达稳定细胞株需要经过一系列标准化流程。
(1) 载体设计是第一步。将目的基因克隆至转座子载体中，两侧为转座酶识别序列——末端反向重复序列。
(2) 根据需求选择适当的启动子，如组成型启动子或可诱导型启动子。
(3) 细胞转染是关键步骤。将重组转座子载体与转座酶表达载体按一定比例混合，共同转染目标细胞。
(4) 常用的转染方法包括电转和脂质体转染。
(5) 筛选富集是获得稳定细胞株的必要过程。转染48小时后，加入适当的筛选药物（如嘌呤霉素）进行压力筛选。
(6) 持续筛选约一周，直至未转染的对照组细胞全部死亡。
(7) 单克隆筛选与验证确保细胞株的纯度和质量。使用有限稀释法分离单细胞克隆，扩大培养后通过Western blot、流式细胞术等方法检测外源基因表达水平。
(8) 流式细胞术分析显示，经过上述流程获得的稳定细胞株，其GFP阳性率可达95%以上。
转座子系统在稳定细胞株构建中展现出多重优势。它避免了传统质粒随机整合的低效率和不稳定性，也克服了病毒系统的安全风险和制备复杂性。
整合机制优越：转座子介导的整合是酶促反应，效率远高于普通质粒的随机整合。
承载容量大：转座子系统可容纳大片段DNA插入，甚至能够实现上百Kb的BAC片段的完整整合，这对于大基因或复杂表达元件的操作尤为重要。
基因表达稳定：由于转座子介导的是稳定基因组整合，外源基因能够在无持续抗生素压力下长期稳定表达。实验证明，经过9代以上传代，细胞仍能保持强烈的目的蛋白表达。
安全性高：与慢病毒系统不同，转座子系统不需要病毒包装，降低了插入突变风险，也减少了生物安全限制。
转座子介导的稳定细胞株构建技术已在多个领域展现广泛应用。
在细胞治疗领域，睡美人转座子系统已成功用于CAR-T细胞的制备。
通过电穿孔将转座子载体导入T细胞，实现CAR基因的稳定整合和表达，为肿瘤治疗提供新策略。
在蛋白质生产中，该技术可用于构建高效表达特定蛋白的工程细胞系，用于工业级或临床级重组蛋白的生产。
在药物筛选平台构建方面，稳定表达特定靶标蛋白的细胞株可用于高通量药物筛选，评估候选药物的效力和特异性。
