▋技术简介
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一种由双链RNA（dsRNA）介导的基因沉默的研究工具，几乎存在于所有真核生物中。 dsRNA是指双链核糖核酸，是Double-stranded RNA的缩写。当病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅速产生反应，其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA（大约20～25 bp），即siRNA。 siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链，继之由反义siRNA再与体内一些酶（包括内切酶、外切酶、解旋酶等）结合形成RNA诱导的沉默复合物（RNA-induced silencing complex，RISC）。RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合，RISC具有核酸酶的功能，在结合部位切割mRNA，切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解，从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。
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载体介导的RNAi：是把SiRNA克隆到shRNA表达载体中，在细胞中也是能形成发夹结构的非编码小RNA。ShRNAS(RNA-Short hairpin RNAs):即短发夹RNA，是由两个短反向重复序列，中间一茎环(loop)序列分隔，组成发夹结构，由pol启动子控制。由5-6个T组成RNApoI亚终止位点。shRNA质粒载体通过转染细胞，在细胞内的形成siRNA而最终发挥沉默靶基因的作用。
慢病毒介导的RNAi：把SiRNA克隆到shRNA慢病毒表达载体中，通过病毒包转成慢病毒感染细胞,可以在细胞中实现长期稳定表达出SiRNA,从而引起靶基因沉默。
▋shRNA套装
有效的siRNA是基因沉默成功与否的关键，并非每个siRNA都能有效地引发基因沉默。关于shRNA设计，可以参考以下设计原则：shRNA的干扰效果取决于多个因素，包括shRNA的长度、茎环结构、GC含量、shRNA的热力学稳定性、靶序列的二级结构、对于其它基因的脱靶效应等。因此，选择多个shRNA用于打靶有助于发现敲低效率最高的shRNA。
纽万生物提供的shRNA（3+1）套装包含3个针对你的目的基因的定制shRNA载体，以及一个可用于测试多个shRNA的高性价比的scramble对照病毒。
▋服务内容
服务类型 | 客户提供 | 服务内容 | 周期 | 价格 |
shRNA载体构建 | ² siRNA/shRNA序列 ² 目的载体（或选用我司载体） ² 实验信息 | Ø 引物合成 Ø 质粒准备、酶切连接、转化和筛选 Ø 测序和酶切验证 Ø 出具实验报告 | 5-6周 | |
3+1 shRNA套装 | ² 目的基因基因 ² 目的载体（或选用我司载体） ² 实验信息 | Ø 合成3个shRNA引物 Ø 质粒准备、酶切连接、转化和筛选 Ø 测序和酶切验证 Ø 出具实验报告 | 5-6周 |
▋服务流程
▋服务优势
丰富的载体骨架和载体元件可供选择；
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序列100%验证，保证克隆序列正确、完整无突变，周期短；
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专业的技术支持为您解决shRNA的选择、载体设计、实验难点等问题。
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