▋技术简介
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA)
介导的基因沉默的研究工具,几乎存在于所有真核生物中。
dsRNA是指双链核糖核酸,是Double-stranded RNA的缩写。当病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅速产生反应,其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约20~25 bp),即siRNA。
siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链,继之由反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合,RISC具有核酸酶的功能,在结合部位切割mRNA,切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解,从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。
▋原理图
▋制备方法
▋套装介绍
有效的siRNA是基因沉默成功与否的关键,并非每个siRNA都能有效地引发基因沉默。关于siRNA设计,可以参考以下设计原则:shRNA的干扰效果取决于多个因素,包括shRNA的长度、茎环结构、GC含量、shRNA的热力学稳定性、靶序列的二级结构、对于其它基因的脱靶效应等。因此,选择多个shRNA用于打靶有助于发现敲低效率最高的shRNA。
纽万生物提供的shRNA(3+1)套装包含3个针对你的目的基因的定制shRNA载体,以及一个可用于测试多个shRNA的高性价比的scramble对照病毒。
▋服务类型
项目名称 | 内容 | 周期 | 价格 |
shRNA载体构建 | 客户提供siRNA/shRNA序列,我司构建 | 2-4周 | 询价 |
由我公司设计3+1 shRNA序列,并完成构建 | 2-4周 | 询价 |
▋服务流程
▋服务优势
丰富的载体骨架和载体元件可供选择;
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序列100%验证,保证克隆序列正确、完整无突变,周期短;
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专业的技术支持为您解决shRNA的选择、载体设计、实验难点等问题
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