研究药物对目的细胞侵袭能力的影响
成功案例
2023-05-05
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研究思路


为研究某药物对目的细胞侵袭能力产生的影响,将药物加入到细胞中培养,通过侵袭实验检测侵袭力。通过Transwel侵袭实验检测药物对细胞侵袭能力的影,探索药物对肿瘤的潜在作用。





 

研究方法


1.实验设计

组别根据药物剂量分为正常组、低剂量用药组、高剂量用药组,每组在进行药物处理后,检测细胞的侵袭能力,每组设计3个重复。


 

2、细胞接种和药物处理

对细胞进行常规的培养、换液和传代,细胞接种于6孔板种,对细胞进行药物处理

 

3、Transwell检测和数据处理

细胞接种于Transwell小室,48h后染色拍照,对侵袭的细胞进行计数和统计学分析。

 




预期结果


通过Tranwell实验检测,在不同的药物处理下,细胞的侵袭能力发生明显变化。

 




实验方法


▉ 准备细胞

对细胞进行常规培养、换液、传代;


▉ 包被基质胶Transwell小室

1)于4℃溶解matrigel胶过夜,将小室、培养板、枪头、1640培养基等4℃冰箱预冷;

2)用冷的无血清1640培养基稀释matrigel胶,Matrigel:1640培养基=1:8,每个小室加45ul matrigel工作液;

337℃,5%CO2培养箱风干过夜


▉ 细胞处理及细胞侵袭力测定

1)对目的细胞进行常规培养、换液、传代;待细胞融合至70%~80%时,将细胞接种于6孔板中。

2)第二天分别加入不同浓度(0110 ng/ml)的药物对细胞进行处理48h后,常规消化、离心,培养基洗涤并制备细胞悬液收集各个处理组细胞,每孔加入5×104个细胞于 Transwell细胞培养板的小室上室,在下室加入600ul完全培养基。

4)分别孵育48小时后,PBS洗涤2遍,甲醛固定30minPBS洗涤2遍,0.1%结晶紫染色15minPBS洗涤2遍,风干后,显微镜(100×)下随机选取5个随机视野,进行拍照。


 ▉ 统计分析

用软件对染色的细胞进行细胞技术,并进行统计分析。





 结果分析


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图1 不同药物处理对细胞侵袭能力影响

 



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图2 不同药物处理对细胞侵袭能力影响统计学分析




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