一、样本准备量

二、样本收集

1. 基因模板样品

1.1 质粒载体

若提供质粒总量不低于2ug，浓度不低于50ng/ul，也可提供甘油菌1ml即可。需提供质粒测序结果，和载体图谱。可以-20℃/-80℃冰箱中贮存，冰袋或者干冰运输。

1.2 PCR产物

若提供PCR产物，请提供大于20ul的量，同时需要提供凝胶电泳图和PCR产物测序结果，可以-20℃/-80℃冰箱中贮存，冰袋或者干冰运输。

2. 组织样品

组织离体15分钟内，立即将其用消毒过的刀具切成黄豆大小（直径约0.5cm）的小块，用PBS或生理盐水洗净血液、体液等影响实验结果的残留成分。随后将样本小块置于液氮中速冻，放入EP管中保存，再放入-80℃冰箱中或者液氮罐中保存，干冰运输。

3. 细胞

3.1 贴壁细胞

吸净培养容器中的培养基，并加入PBS，用细胞铲将细胞刮入离心管中（或加入适量PBS清洗1次细胞后用胰酶消化细胞，加入血清终止反应后收集于离心管中），离心去掉上清，再加入PBS清洗细胞2次，离心后样本放入液氮或-80度冰箱中保存，细胞总量不低于10⁷个。

3.2 悬浮细胞

将细胞悬液转移至样品管中，离心弃掉上清。去除上清后用PBS清洗细胞2-3次，直至把所有的培养基去除干净；将离心后的细胞放入液氮或-80℃冰箱中保存。细胞总量不低于10⁷个。

3.3 甲醛交联细胞

如果您做的是ChIP染色质免疫共沉淀实验，需要先对细胞进行甲醛交联。  交联方法如下：

（1）胰酶消化收集一千万个细胞；

（2）用预冷的PBS漂洗3次，每次在4℃条件下500 g 离心5 min离心去掉上清；

（3）加入终浓度为1 %（PBS稀释）的甲醛，总体积为10 mL，室温交联10 min；

（4）加入终浓度为0.125 M 甘氨酸（PBS溶解）的甘氨酸，终止交联10min；

（5）4℃条件下500 g离心5 min,去掉上清，用预冷的pbs漂洗3次，每次在4℃条件下500g离心5 min;

（6）细胞沉淀液-80℃保存,备用。

方法二：

（1）取出1平皿细胞（10cm平皿），加入190ul 37％甲醛，使得甲醛的终浓度为1％。（培养基共有7ml）

（2）7℃孵育10min。(恒温培养箱)

（3）终止交联：加 350ul 2.5M甘氨酸于平皿中。混匀后，在室温下放置5min即可。

（4）吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞3次。

（5）用PBS将cell刮下来，2000g离心5min，去上清。

4. 细菌悬液

将细菌悬液转移至样品管中离心，去除上清培养基，再用PBS清洗三次，清洗干净后，将菌体沉淀转移至1.5ml的EP管中，封口膜封口，管子上做好标记，将样品放入-80℃冰箱中保存，干冰运输。

5. 血液样本

5.1 全血

采集新鲜血液放置抗凝管或血袋中保存，样本量大于2ml，需当天送达，4℃运输。或者新鲜血液分离白细胞，分离后的白细胞样本放入-80℃冰箱中保存，干冰运输。

5.2 血清

使用非抗凝管（或无热原无内毒素的离心管）采集血液样本，室温下静置1-3个小时不等或4℃静置过夜使其自然凝固，2000-3500转/分4℃低温离心10-20min，吸取收集上清，血清需要量为200ul，如量较多建议分装保存，避免反复冻融，-80℃冰箱中保存，干冰运输。

5.3 血浆

使用抗凝管（可根据样本选择EDTA、肝素钠、柠檬酸钠或枸橼酸纳作为抗凝剂）采集血液样本，混合10-20分钟后，2000-3000转/分4℃条件离心20分钟（或4000转/分离心5min），仔细吸取收集上层液体，血清需要量为200ul，如量较多建议分装保存，避免反复冻融，-80℃冰箱中保存，干冰运输。 

三、 样本准备注意事项

（1）如果EP管中加了裂解液等液体，请勿直接放入液氮中，迅速冷到可能会导致管子炸裂。

（2）各样品管上做好清晰的样品标记，尽可能简化标记、方便区分和识别。

（3）放置样本的EP管应用封口膜密封，防止样本泄露，装在密实封口袋中。封口袋上也写明样本信息，方便识别和保存。

（4）请按要求填写《实验信息表》上信息，如样本名称、数量等信息；填写好后先发送一份电子版的给项目负责人保存，寄送时再打印一份放入样本中。

（5）管上的标识要与样本信息表应相同，如不同请在《实验信息表》上另外注明。

四、 样本寄送

（1）对于需要4℃运输的样品，请采用冰袋运输；

（2）对于需要干冰运输的样品，建议用厚实的泡沫盒盛放干冰（干冰最好先用厚实塑料袋装），由于干冰可以挥发，所有准备的干冰量一定要足量，建议先用塑料袋装干冰，样本深埋，封紧泡沫盒；泡沫盒外再装一个纸箱，避免运输过程中泡沫盒受损。若严格按照以上条件执行，一般10公斤干冰可以维持3~4天时间。

（3）快递样本请保证在工作日期间到达我公司。如果样品需要在周末到达，请提前与我们联系，并且寄送样本时提醒快递公司周末照常派件；如因样本在假期未能被正常派送而导致的问题，客户需承担相应损失，请知悉。