一、样本准备量

注：以上样本量为经验所总结，如果实际检测样本蛋白量不满足实验需要，请按照实际情况增加送样量。如果样本比较容易收集，您也可以一次准备两份样本，分装保存。

二、样本收集

1. 细胞

1.1 贴壁细胞

吸净培养容器中的培养基，并加入PBS，用细胞铲将细胞刮入离心管中（或加入适量PBS清洗1次细胞后用胰酶消化细胞，加入血清终止反应后收集于离心管中），离心去掉上清，再加入PBS清洗细胞2次，离心后样本放入液氮或-80度冰箱中保存，细胞总量不低于10⁷个。

1.2 悬浮细胞

将细胞悬液转移至样品管中，离心弃掉上清。去除上清后用PBS清洗细胞2-3次，直至把所有的培养基去除干净；将离心后的细胞放入液氮或-80℃冰箱中保存。细胞总量不低于10⁷个。

【注意事项】

（1）细胞个头大小也会影响蛋白量，如果实测样本蛋白量不满足实验需要，请按照实际情况增加送样量。如果样本比较容易收集，您也可以一次准备两份样本，分装保存。

（2）PBS需要去除，不可以与细胞一起保存。

2. 组织样品

组织离体15分钟内，立即将其用消毒过的刀具切成黄豆大小（直径约0.5cm）的小块，用PBS或生理盐水洗净血液、体液等影响实验结果的残留成分。随后将样本小块置于液氮中速冻，放入EP管中保存，再放入-80℃冰箱中或者液氮罐中保存，干冰运输。

【注意事项】

（1）样本不要在生理盐水中过久地漂洗。

（2）干冰或低温冰箱降温速度缓慢，样本直接放进冰箱或干冰中容易引起降解，故取样后建议短时间内放入液氮中速冻，冷冻后的样本再转移到干冰或-80℃冰箱中。

3. 植物组织

3.1 叶片、花

直接将叶片或花剪下，用无菌双蒸水洗净；用锡箔纸包好后放入液氮或者-80℃冰箱保存。

3.2 根、茎

将要取的根部用无菌双蒸水洗净，去除泥土等物质；如样本根的体积很小，冷冻后易碎，需用锡箔纸包好后放入液氮，或置于-80℃冰箱保存；如根体积较大，取样时先将根部剪成小块，用锡箔纸包好后放入液氮或-80℃冰箱中保存。

3.3 果实

切下组织后用无菌双蒸水洗净；用锡箔纸包好后放入液氮或-80℃冰箱中保存。

3.4 藻类

离心收集并用PBS清洗干净，约1-2mL沉淀可以提取到1mg蛋白，送样时最好用进口EP管分装为300-500μL/管。

【注意事项】

（1）组织块用锡箔纸包裹着，放入液氮迅速降温。不要保存在EP管里（冷冻后不易取出）；

（2）操作时间过长可能会导致样本降解。由于袋子上的字迹容易被抹去，可以在袋子里放一张纸片，纸片上写编号信息，若样本体积太大可以分成若干份；

（3）以上样本量为经验值，如果实际检测样本蛋白量不满足实验需要，请按照实际情况增加送样量。如果样本比较容易收集，您也可以一次准备两份样本，分装保存。

4. 微生物

    4.1 微生物悬液

将细菌悬液转移至样品管中离心，去除上清培养基，再用PBS清洗三次，清洗干净后离心，将菌体沉淀转移至1.5ml的EP管中，封口膜封口，管子上做好标记，将样品放入-80℃冰箱中保存，干冰运输。

    4.2 果皮微生物

样本处理后，根据菌斑出现的位置，用生理盐水或者无菌PBS浸湿的拭子把果表面擦拭一遍，每个样本使用3-5根左右进行擦拭，擦拭完成后，将每个取样点的棉签头剪下集中放入 2-5 ml 灭菌冻存管，棉签完全浸泡完全，盖子盖紧密封。记录采样样品的相应信息（样本名，采样时间等），液氮速冻，-80℃保存，干冰寄送。

【注意事项】取样过程中需佩戴口罩，每个样本取样时需更换无菌手套。

 4.3 皮肤微生物

将生理盐水浸湿的无菌拭子按在取样表面上，用力使其弯曲与擦拭表面成45度，平稳而缓慢地擦拭取样表面。翻转拭子，让拭子的另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直，取样位置应避免与微生物取样点重复。擦拭完成后，将每个取样点的棉签头剪下集中放入2-5 ml 灭菌冻存管，棉签完全浸泡完全，盖子盖紧密封，每管保存3-5个拭子。记录采样样品的相应信息（样本名，采样时间等），液氮速冻，再放入-80℃保存，干冰寄送。

【注意事项】取样过程中需佩戴口罩，每个样本取样时需更换无菌手套。

5. 血液样本

5.1 全血

采集新鲜血液放置抗凝管或血袋中保存，样本量大于2ml，需当天送达，4℃运输。或者新鲜血液分离白细胞，分离后的白细胞样本放入-80℃冰箱中保存，干冰运输。

5.2 血清

使用非抗凝管（或无热原无内毒素的离心管）采集血液样本，室温下静置1-3个小时不等或4℃静置过夜使其自然凝固，2000-3500转/分4℃低温离心10-20min，吸取收集上清，血清需要量为200ul，如量较多建议分装保存，避免反复冻融，-80℃冰箱中保存，干冰运输。 

5.3 血浆

使用抗凝管（可根据样本选择EDTA、肝素钠、柠檬酸钠或枸橼酸纳作为抗凝剂）采集血液样本，混合10-20分钟后，2000-3000转/分4℃条件离心20分钟（或4000转/分离心5min），仔细吸取收集上层液体，血清需要量为200ul，如量较多建议分装保存，避免反复冻融，-80℃冰箱中保存，干冰运输。

三、样本准备注意事项

（1）如果EP管中加了裂解液、PBS等液体，请勿直接放入液氮中，迅速冷到可能会导致管子炸裂。

（2）各样品管上做好清晰的样品标记，尽可能简化标记、方便区分和识别。

（3）放置样本的EP管应用封口膜密封，防止样本泄露，装在密实封口袋中。封口袋上也写明样本信息，方便识别和保存。

（4）请按要求填写《实验信息表》上信息，如样本名称、数量等信息；填写好后先发送一份电子版的给项目负责人保存，寄送时再打印一份放入样本中。

（5）管上的标识要与样本信息表应相同，如不同请在《实验信息表》上另外注明。

四、样本寄送

（1）对于需要4℃运输的样品，请采用冰袋运输；

（2）对于需要干冰运输的样品，建议用厚实的泡沫盒盛放干冰（干冰最好先用厚实塑料袋装），由于干冰可以挥发，所有准备的干冰量一定要足量，建议先用塑料袋装干冰，样本深埋，封紧泡沫盒；泡沫盒外再装一个纸箱，避免运输过程中泡沫盒受损。若严格按照以上条件执行，一般10公斤干冰可以维持3~4天时间。

（3）快递样本请保证在工作日期间到达我公司。如果样品需要在周末到达，请提前与我们联系，并且寄送样本时提醒快递公司周末照常派件；如因样本在假期未能被正常派送而导致的问题，客户需承担相应损失，请知悉。