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TUNEL检测细胞凋亡
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技术简介

细胞凋亡时,染色体的断裂是个渐进的分阶段的过程,染色体首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后,大约30%的染色体在核酸内切酶的作用下,以核小体为单位被随机切断形成180-200bp的核小体-DNA多聚体。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl TransferaseTdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素(FITC)、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到DNA 3'-末端,可通过荧光显微镜或流式细胞仪进行细胞凋亡检测,这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测的原理。

 

 

实验流程

(1)PBS洗涤1次细胞爬片;

(2)用4%多聚甲醛固定细胞30-60 min;

(3)用PBS洗涤1次;

(4)加入含0.1% Trition X-100的PBS,冰浴孵育2 min;

(5)用PBS洗涤2次;

(6)滴加50uL TUNEL检测液,37°C避光孵育60 min;

(7)PBS洗涤3次;

(8)用抗荧光淬灭封片液封片后荧光显微镜下观察。

结果图例

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实验类型


项目名称

内容

周期

价格

Tunel检测

检测细胞凋亡

2-3周

询价


服务流程


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服务优势


1)目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的方法;

2)已广泛用于生物、医学研究领域,其可在细胞凋亡发生早期,检测到DNA片段的产生,并可直接使用在组织切片上,观察细胞凋亡发生的位置,所以是目前为止广泛接受与使用的一种细胞凋亡分析方法;

3)其适用范围广泛,包含各类贴壁细胞、悬浮细胞(或细胞悬液)以及组织切片。




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