▇ 技术简介
蛋白质控制了细胞中的所有生物系统，通常它们不是独立作用，绝大多数蛋白质会与其他蛋白质相互作用，一起参与生命过程。免疫共沉淀是研究蛋白与蛋白互作的一种常用的方法，其原理基于抗原-抗体免疫反应，利用抗体结合于琼脂糖磁珠上的Protein A/G，在蛋白液中加入抗原特异的抗体进行孵育，当抗体免疫沉淀抗原蛋白时，能与抗原蛋白结合的目的蛋白一并被沉淀下来，形成“目标蛋白+抗原蛋白+抗体+Protein A/G”免疫复合物，经免疫印迹或质谱检测互作的蛋白。
▇ 方法路线
CoIP-MS实验的流程包括以下几个主要步骤，蛋白液与抗体孵育→免疫复合物与蛋白A/G琼脂糖磁珠孵育结合→去除非互作蛋白→洗脱获得蛋白互作复合物→蛋白互作复合物进行WB检测/质谱鉴定。如下图所示：
▇ 结果案例
▇ CoIP实验的优缺点
优点 （1）可以获取直接或者间接相互作用的蛋白； （2）互作的蛋白质都是在胞内经翻译后表达的，处于天然状态； （3）蛋白的相互作用的过程是在胞内自然状态下进行的，接近真实的互作过程； （4）可以研究具有修饰的目的蛋白； （5）操作流程简便。 | 缺点 （1）对于低亲和力或瞬间相互作用的结合蛋白可能会检测不到； （2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，可能有第三者在中间起桥梁作用；对于获取到的互作蛋白，不能判断是直接互作还是间接互作， （3）必须使用可用于免疫共沉淀的抗体进行实验； （4）可能因为多种非特异性吸附带来假阳性结果，需要设置严格的对照。 |
▇ 注意事项
（1）为获取适用于免疫共沉淀的蛋白，需要在温和的裂解条件下进行蛋白提取；
（2）需使用可用于免疫共沉淀的抗体；
（3）设计合理的对照。
