随着高通量测序技术的发展,越来越多的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)被注释出来,RNA pull-down作为研究RNA与蛋白互作的核心技术,已成为研究焦点。RNA pull-down是以目的RNA序列为中心,寻找或验证与该RNA片段结合的蛋白质。对目的RNA片段产物进行生物素标记,通过链霉亲合素固定到磁珠上,当目的RNA与蛋白质发生结合后,再将其余游离的蛋白质洗脱,即得到核酸与蛋白质结合产物。
用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
◆ 实验流程 ◆
◆ 结果展示 ◆
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