随着高通量测序技术的发展,越来越多的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)被注释出来,RNA pull-down作为研究RNA与蛋白互作的核心技术,已成为研究焦点。RNA pull-down是以目的RNA序列为中心,寻找或验证与该RNA片段结合的蛋白质。对目的RNA片段产物进行生物素标记,通过链霉亲合素固定到磁珠上,当目的RNA与蛋白质发生结合后,再将其余游离的蛋白质洗脱,即得到核酸与蛋白质结合产物。
用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
制备蛋白裂解液:根据实验需求,收集适量的细胞或组织样品,并进行蛋白抽提。 制备生物素标记RNA探针:通过体外转录法标记生物素RNA探针。 RNA-蛋白质复合物的形成:将生物素标记的RNA探针与蛋白裂解液孵育,在适当的条件下,利用生物素与链霉亲和素之间的强亲和力,通过链霉亲和素磁珠使RNA与蛋白质形成稳定的复合物。 洗涤与洗脱:孵育完成后,需要进行洗涤步骤以去除未结合的蛋白。随后,通过洗脱步骤将结合的蛋白从磁珠上分离出来。 蛋白质的检测:通过Western blot检测特异性蛋白是否与靶RNA片段结合,或者通过质谱法鉴定可能与RNA片段相互作用的蛋白质。 | ![]() |
◆ 服务内容
服务类型 | 客户提供 | 服务内容 | 周期 | 价格 |
RNA Pull down-WB |
ü RNA基因模板(或委托我司克隆/合成) ü 实验样本 ü 待验证目的蛋白WB抗体 ü 实验信息表
| ² 制备正义链和反义链探针 ² 样本裂解 ² Input Western blot检测目的蛋白 ² RNA Pull down实验 ² Western blot检测RNA Pull down产物 ² 出具实验报告 | 5周 | |
RNA Pull down-MS |
ü RNA基因模板(或委托我司克隆/合成) ü 实验样本 ü 实验信息表
| ² 制备正义链和反义链探针 ² 样本裂解 ² RNA Pull down实验 ² RNA Pull down产物质谱检测和分析 ² 出具实验报告 | 8周 |
◆ 结果展示
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