技术简介
诱导转移(Transwell)是肿瘤运动性研究常用的方法,要是体外检测肿瘤细胞主动移行的能力,除诱导转移外,还有划痕实验也是常用的方法。细胞运动性的研究,尤其是在肿瘤细胞的侵蚀转移中应用很广泛。肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,在肿瘤转移过程中的某些阶段,肿瘤细胞表现较强的运动能力,如肿瘤细胞从原发瘤灶分离,进而侵入到临近组织及再穿过血管壁进入血液循环和穿出血管壁进入激发部位等,因为细胞运动性研究再肿瘤细胞侵袭和转移的机制上由重要的作用。
Transwell小室的外形是可以放置在孔板中的小杯子,杯底层是一层具有通透性的聚碳酸酯膜,一般膜的孔径选择8μm的孔径。将Transwell小室放入培养板中,Transwel小室称为上室,培养板称为下室,上下室以聚碳酸酯膜隔离。将细胞接种在上室内,由于聚碳酸酯膜具有通透性,下层培养基液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养基的成分对细胞生长、运动等的影响。另外,Transwel小室有不同的孔径和不同处理的聚碳酸 酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等方面的研究。
与迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室铺一层基质胶,用于模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,需要先分泌基质金属蛋白酶(MMPS)将基质胶分解,放可以通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞两可以反应肿瘤细胞的侵袭能力。
①准备细胞,对细胞进行常规培养、换液、传代; ②包被基质胶Transwell小室; ③细胞处理; ④将细胞接种于 Transwell细胞培养板的小室上室; ⑤孵育48小时后,甲醛固定,0.1%结晶紫染色; ⑥风干后,显微镜下随机选取5个随机视野,进行拍照; ⑦用软件对染色的细胞进行细胞技术,并进行统计分析。 |
服务内容
服务类型 | 客户提供 | 服务内容 | 周期 | 价格 |
Transwell迁移实验 | ² 细胞处理用药物或质粒 ² 目的细胞(或选用我司细胞) ² 实验信息 | Ø 细胞培养,接种 Ø 加药处理 Ø 结晶紫染色,拍照 Ø 出具实验报告 | 2-3周 | |
Transwell侵袭实验 | ² 细胞处理用药物或质粒 ² 目的细胞(或选用我司细胞) ² 实验信息 | Ø 细胞培养,接种 Ø 加药处理 Ø 结晶紫染色,拍照 Ø 出具实验报告 | 2-3周 |
服务流程
结果案例
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应用范围
共培养体系 细胞在滤膜孔径小于3.0um的条件下不会通过,因此,若研究不涉及细胞运动能力、不需细胞穿过滤膜时,则应选择3.0um以下孔径。将细胞A种于上室,细胞B种于下室,可研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。 | 肿瘤细胞迁移实验 上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室迁移,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。 | |
趋化作用 细胞B对细胞A的趋化作用: 将细胞A种于上室,细胞B种于下室,研究细胞B分泌或代产生的物质对细胞A的趋化作用; 趋化因子对细胞的趋化作用: 将细胞种于上室,下室加入某种趋化因子,研究该趋化因子对细胞的趋化作用。 | 肿瘤细胞侵袭实验 与肿瘤细胞迁移实验类似,但与肿瘤细胞迁移实验不同的是,上室需铺上一层基质胶(常用人工重构基底膜材料Matrigel) 以模仿体内细胞外基质 (Extracellular matrix,ECM),细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs) 将基质胶降解,方可通过聚碳酸酷膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。 |