蛋白免疫印迹（Western Blot）是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
Western Blot是采用的聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，通过是抗体特异性结合到目的抗原上，再将可以“显色”二抗与一抗结合，经过底物显色或放射自显影以检电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
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① 蛋白提取： 根据样本类型选择合适的蛋白提取方法。 ② 蛋白定量检测和变性： 使用BCA蛋白定量方法测定组织总蛋白浓度并建立BCA蛋白定量标准曲线计算得出各样品蛋白浓度； 加入5 × Loading Buffer至蛋白样品中，在100℃水浴变性5 min后转移至-80℃保存或置于冰上进行下一步实验。 ③ SDS-PAGE电泳： 制备SDS-PAGE凝胶，蛋白样品上样至SDS-PAGE胶加样孔内，连接电泳仪，调节电流跑胶，直至Loading Buffer中溴酚蓝跑至胶底时停止电泳。 ④ 转膜： 将凝胶和PVDF膜放入两层滤纸间，夹入阴电极和阳电极间的转膜夹，插入转膜槽。加入提前预冷的Transfer Buffer，置于冰水浴中恒流进行转膜。 ⑤ 封闭： 将PVDF膜转移至5%脱脂牛奶在摇床室温封闭1-2 h。 ⑥ 一抗/二抗抗体孵育： 按照抗体说明书用一抗稀释液稀释目的抗体。将蛋白条带浸泡于稀释好的一抗/二抗中，摇床中孵育。 ⑦ 底物显色： 将条带放入曝光仪中，均匀滴上新配的化学发光液进行曝光。 灰度值分析： 保存曝光图片，并用Image J软件对条带进行灰度分析。
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服务类型 | 客户提供 | 服务内容 | 周期 | 价格 |
常规蛋白WB检测 | ² 实验样本 ² 蛋白抗体 ² 实验信息表 | Ø 蛋白提取 Ø SDS-PAGE跑胶 Ø 转膜和孵育抗体 Ø 显影 Ø 出具实验报告 | 5-6周 | |
磷酸化蛋白WB检测 | ² 实验样本 ² 蛋白抗体 ² 实验信息表 | Ø 蛋白提取 Ø SDS-PAGE跑胶 Ø 转膜和孵育抗体 Ø 显影 Ø 出具实验报告 | 5-6周 | |
SDS-PAGE | ² 蛋白样本 ² 实验信息表 | ² SDS-PAGE ² 出具实验报告 | 1-2周 |
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高效的蛋白提取效率 | 高灵敏凝胶成像系统曝光检测 | 严格的质量控制 | 提供灰度值检测和统计学分析 |
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