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shRNA干扰载体构建
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▋技术简介


    RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA)介导的基因沉默的研究工具,几乎存在于所有真核生物中。

   dsRNA是指双链核糖核酸,是Double-stranded   RNA的缩写。当病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅速产生反应,其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约20~25 bp),即siRNA。

   siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链,继之由反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合,RISC具有核酸酶的功能,在结合部位切割mRNA,切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解,从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。

 

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载体介导的RNAi:是把SiRNA克隆到shRNA表达载体中,在细胞中也是能形成发夹结构的非编码小RNA。ShRNAS(RNA-Short hairpin RNAs):即短发夹RNA,是由两个短反向重复序列,中间一茎环(loop)序列分隔,组成发夹结构,由pol启动子控制。由5-6个T组成RNApoI亚终止位点。shRNA质粒载体通过转染细胞,在细胞内的形成siRNA而最终发挥沉默靶基因的作用。


慢病毒介导的RNAi:把SiRNA克隆到shRNA慢病毒表达载体中,通过病毒包转成慢病毒感染细胞,可以在细胞中实现长期稳定表达出SiRNA,从而引起靶基因沉默。




▋shRNA套装

 

       有效的siRNA是基因沉默成功与否的关键,并非每个siRNA都能有效地引发基因沉默。关于shRNA设计,可以参考以下设计原则:shRNA的干扰效果取决于多个因素,包括shRNA的长度、茎环结构、GC含量、shRNA的热力学稳定性、靶序列的二级结构、对于其它基因的脱靶效应等。因此,选择多个shRNA用于打靶有助于发现敲低效率最高的shRNA。

      纽万生物提供的shRNA(3+1)套装包含3个针对你的目的基因的定制shRNA载体,以及一个可用于测试多个shRNA的高性价比的scramble对照病毒。




▋服务内容


服务类型

客户提供

服务内容

周期

价格

shRNA载体构建

²  siRNA/shRNA序列

²  目的载体(或选用我司载体)

²  实验信息

Ø  引物合成

Ø  质粒准备、酶切连接、转化和筛选

Ø  测序和酶切验证

Ø  出具实验报告

5-6

请点击询价

3+1 shRNA套装

²  目的基因基因

²  目的载体(或选用我司载体)

²  实验信息

Ø  合成3个shRNA引物

Ø  质粒准备、酶切连接、转化和筛选

Ø  测序和酶切验证

Ø  出具实验报告

5-6

请点击询价



 ▋服务流程

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▋服务优势


丰富的载体骨架和载体元件可供选择;

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序列100%验证,保证克隆序列正确、完整无突变,周期短;

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专业的技术支持为您解决shRNA的选择、载体设计、实验难点等问题。

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