RNA荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)技术通过应用非放射性荧光物质标记的核酸探针,根据碱基互补配对原则,使荧光探针与组织或细胞内的目标RNA杂交,最后荧光显微镜观察,可直接观察到组织原位上一种或多种RNA的表达与分布。
FISH为研究人员提供了一种新的用于可视化或绘制单个细胞中的遗传物质(包括特定基因或基因的一部分)的方法,是了解各种染色体异常和其他基因突变的重要工具。FISH操作灵活、安全、检测结果准确,能够对各种种属的样本(如植物组织、动物组织等)进行检测,特异性较高,是一种非常通用的程序。
纽万生物提供各种RNA荧光原位杂交技术服务,检测的RNA类型包括mRNA、lncRNA、circRNA等。
实验对象
组织样本;已包埋的石蜡组织;切片;细胞。
我们提供包括从探针设计、样本处理、杂交检测、基因表达研究到数据分析等一站式FISH技术服务,实现了检测程序的规范化和标准化,提高了实验结果的准确性,降低了假阳性和假阴性,保证为客户提供高质量的FISH服务。
(1)细胞接种于6孔板中,用4%多聚甲醛固定;
(2)通透,加入预冷的通透液后加入1X PBS 洗涤3 次;
(3)探针变性,探针与杂交液按比例配好,73℃变性,快速转移至置冰上暂存(不可超过30min);
(4)预杂交,滴加预杂交液于切片上,37℃孵育30min后吸弃;
(5)杂交滴加探针与杂交液的混合液于切片上,42℃杂交过夜(16h-20h)。
(6)洗涤
(7)DAPI染核,滴加DAPI,盖膜,避光染色10min;加入1×PBS洗涤3次,避光晾干。(8)荧(8)光显微镜观察,滴加10~20uL抗荧光衰减封片剂进行封片;荧光显微镜/激光共聚焦拍照,或-20℃避光暂存。
实验类型
项目名称 | 内容 | 周期 | 价格 |
FISH检测 | 探针设计合成、FISH检测和拍照分析 | 2-3周 | 询价 |
服务流程
特异性好,实验准确。
探针稳定,可长期保存;
试剂和探针无放射性,安全可控;
FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;
多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;
既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。